课程类别：实践教学课程 课程名称：药学综合实验

开课单位：化工综合实验教学中心 课程编号：N03040216

总学时：64学时 学 分：4

适用专业：制药工程

先修课程：生物化学、药剂学、药物分析、药物合成化学、药物微生物学

一、课程在培养方案中的地位、作用

本实验课是为适应“为本科生实验教学单独设课”的教改要求和培养具有综合能力制药工程专业人才的目标而设立的。课程注重实践能力的培养，强化基础理论知识，同时对研究思维进行系统的培训。以药物化学、药学生物化学、药学微生物学、天然药物化学、药剂学、药物分析等课程为理论基础，开设药物活性成分的提取、分离、制备、鉴定等实验内容，对药物有效成分进行定性分析和含量测定，培养学生对药物研究的基本思路和方法技能。在此基础上，结合我国药物研究的特色，在相关实验的基础上，应用自己合成的原料药或合格的中药材制备出相关中、西药制剂，并采用有关标准对制备出的制剂质量进行评价，树立药品质量严肃性的科学理念。同时，让学生进行综合实验设计，使学生了解制药工程前沿动态、掌握现代分析仪器技术。

二、实验教学内容及基本要求

实验一 病原微生物染色及其药敏性测定

实验目的：

通过革兰氏染色掌握此染色法可将所有具有细胞壁的细菌分为两大类：革兰阳性菌和革兰阴性菌。根据微生物的种类和实验目的不同，考察培养基配比关系及其理化性质，选择合适的培养基以供菌体生长繁殖之用。通过平板培养法，掌握微生物抗药性的原理与药敏性测定方法。通过高压灭菌器的使用，领会高压蒸汽灭菌原理和方法。

实验原理：

革兰染色法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（酒精或丙酮）脱色，再用复染剂染色。如果细菌不被脱色而保存原染液颜色者为革兰阳性菌(G^＋)；如被脱色，而染上复染液的颜色者为革兰阴性菌(G^-)。

培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质。

高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

各种病原菌对不同的抗菌药物有不同的敏感性。测定敏感性的方法称为药物敏感试验，即在体外通过被检测药液的稀释或扩散，测定抗菌药物对病原微生物有无抑制或杀灭作用。

实验内容：

1.革兰染色

2.培养基的配制

3.普通光学显微镜的油镜使用与保养方法

4.药敏性的测定方法

5.手提式高压灭菌器的使用方法

掌握要点：

染色过程、油镜的使用与保养；培养基的配制原则、微生物药敏性测定方法，高压灭菌器的使用。

实验二 酵母核糖核酸的提取和测定

实验目的：

1.了解并掌握浓盐法提取RNA的原理和方法

2.掌握紫外分光光度计测定RNA含量的方法

实验原理：

酵母作为工业上大量生产核酸的最为理想的微生物，提取RNA 的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱性和浓盐法。

本实验采取浓盐法。核酸不论是DNA 还是RNA，都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物。而核苷酸是由糖、碱基和磷酸构成。要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量，只需要测定组成核苷酸的一种成分，如磷、糖或碱基，便可计算出核糖的含量。因为核酸分子中这三个组份是以等分子比例存在的，即每一个嘌呤或嘧啶分子都与一分子戊糖及一分子磷酸相连接的。所以只要测出其中任何一组分的含量即可求出核糖的含量。

本实验采用紫外吸收法测定核糖核酸含量，因为核酸的组成成分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，最大吸收在260mm 处，利用此特性可以对核酸进行定量测定。

实验内容：

1.盐法从酵母中提取RNA

2.离心法进行RNA分离

3.沉淀RNA、洗涤纯化

4.干燥、含量测定

实验三 高效液相色谱法测定维C银翘片中维生素C含量

实验目的：

1.了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，以及初步掌握其操作技能

2.掌握维c银翘片中维生素c含量的高效液相色谱(HPLC)法检测方法

3.熟悉药典规定的检测方法

实验原理：

维C银翘片是最常用的感冒药，由金银花、连翘、对乙酰氨基酚、维生素C等13味药物制成，具有清凉解表、清热解毒的作用。在现行国家标准中维生素C含量的测定方法有滴定法，分光光度法和HPLC法。色谱法是一种分离技术。试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 液相色谱的流动相为液体（称为淋洗液）。按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 检测波长的选择 ，对抗坏血酸的洗脱液液在100～400nm波长范围内进行扫描，抗坏血酸在186nm处有最大吸收，故选定测定波长为186nm。

实验内容：

1.确定色谱条件

2.绘制标准曲线

3.维C银翘片中维生素C含量的测定

实验四 药用黄连素的提取

实验目的:

1.学习从中草药提取生物碱的原理和方法

2.熟悉固液提取的装置及方法

实验原理:

黄连素是黄色针状体，微溶于水和乙醇，较易溶于热水和热乙醇中，几乎不溶于乙醚，黄连素存在三种互变异构体，但自然界多以季铵碱的形式存在。黄连素的盐酸盐，氢碘酸盐，硫酸盐、硝酸盐均难溶于冷水，易溶于热水，其各种盐的纯化都比较容易。 黄连素是黄色针状体（乙醚），m.p.145⁰C 。可溶于乙醇、难溶于乙醚、苯。可溶于热水，其水溶液具有黄绿色荧光。黄连中黄连素的含量约 4~10%。

实验内容：

1.从中药材黄连中提取黄连素，并计算提取率

2.黄连素的重结晶

掌握要点：

黄连素纯结晶过程中溶剂的选择

实验五 黄连素的制片及基本性质测定

实验目的：

通过黄连素的湿法制粒压片，掌握湿法制粒压片的工艺流程；考查制片过程中填充剂、粘合剂、润滑剂等对片剂的影响；掌握单冲压片机的使用方法。

实验原理：

制软材和湿颗粒：向已混匀的物料中加入适量的润滑剂或粘合剂，用手工将其混合均匀成软材。软材的干湿程度应适宜，使之“握之成团，轻压即散”，并握后掌上不粘粉为度。软材可通过适宜的筛网制成均匀的颗粒。颗粒大小根据片剂大小由筛网孔径来控制，一般大片（0.3～0.5g）选用14～16目，小片（0.3g以下）选用18～20目筛。

干燥和整粒：将已制备好的湿颗粒应尽快干燥。干燥的温度由物料的性质而定。一般50～60℃。湿颗粒干燥后，需过筛整粒以便粘结成块的颗粒散开。同时加入润滑剂和外加法所需的崩解剂与颗粒混匀。

硬度的测定：片剂应有适宜的硬度，

计算片重后压片：根据颗粒所含主药的量计算片重。

硬度的测定：片剂应有适宜的硬度，以免在包装、运输过程中破碎或磨损，因此片剂硬度是反映片剂生产工艺水平、控制片剂质量的一项重要指标。

脆碎度的测定：是指片剂经过振荡、碰撞而引起的破碎程度。是反映片剂生产工艺、控制片剂质量的一项重要指标。

崩解是固体制剂在规定条件和时间内崩解成碎粒，并全部通过筛网，是药物溶出的前提。

实验内容：

1.制软材和湿颗粒的制备

2.干燥和整粒

3.压片

4.硬度、脆碎度及崩解度的测定

掌握要点：

湿法制粒压片的过程，硬度测定、脆碎度测定和崩解测定的全部过程及原理。

实验六 黄连素体外抗菌试验

实验目的：

通过药物体外抗菌活性的测定，掌握微生物培养及菌悬液的制备、涂布；熟悉抑菌圈的测定方法。

实验原理：

利用药物能够扩散渗透到琼脂培养基的性质，将试验菌混入琼脂培养基后倾注倒平板，或将试验菌涂布于琼脂平板的表面，然后用含有待测药物的滤纸片平贴在已经接种了待测菌种的琼脂平板上。经适宜温度培养后，在滤纸片的周围会形成透明的抑菌圈。

实验内容：

1.培养基、菌悬液、药物溶液的制备

2.药物体外抗菌活性的测定方法

3.示教常见抗生素的抗菌谱

掌握要点：

菌悬液的制备及涂布，药物溶液的制备，抑菌圈的测定。

实验七 黄连素薄膜包衣及质量评价

实验目的：

1.通过实验掌握薄膜包衣的原理及过程;

2.掌握薄膜包衣剂溶出速率的测定方法及溶出曲线的绘制

实验原理：

薄膜包衣是利用高分子材料在一定温度、压力等条件下迅速成膜的原理，在药品表面形成一种具有多种作用和特殊功能的高分子薄膜。

溶出度也称溶出速率，是指在规定的溶剂和条件下，药物从片剂、胶囊剂、颗粒剂等固体制剂中溶出的速度和程度。它是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中的崩解和溶出的体外试验方法。

实验内容：

1.黄连素片包薄膜衣

2.外观检查

3.黄连素薄膜包衣的硬度

4.耐湿耐水性实验

5.包衣片溶出速度的测定

掌握要点：

薄膜包衣过程、耐湿耐水性实验、药物溶出速率测定

实验八 黄芪粗多糖的提取、分离纯化

实验目的：

1.学习从中草药提取多糖的原理、提取分离方法及工艺。

2.掌握固液提取的装置及方法。

3.熟悉萃取、离心、蒸发、干燥等单元操作。

4.掌握多糖含量的测定方法。

实验原理：

黄芪多糖溶于水而不溶于醇等有机溶剂，采用热水浸提后用酒精沉淀的方法，对多糖进行提取。多糖的纯化，是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合摇匀)进行脱蛋白，用DEAE Sepharose层析柱进行纯化，然后合并多糖高峰部分，浓缩后干燥，得多糖级分。

实验内容：

1.从黄芪中提取粗多糖

2. 粗多糖的纯化

3.用苯酚－硫酸法测定多糖的含量

掌握要点：

粗多糖的提取、黄芪多糖的含量测定

三、学时分配

四、主要参考书

1. 周长林 主编 《微生物学实验与指导》 中国医药科技出版社 2004年

2. 沈关心 主编 《微生物学与免疫学》 人民卫生出版社 2011年

五、考核方式（包括作业、测验、考试等及其所占比例）

实验操作60%，实验报告30%，上课考核及预习报告以10%记入课程总成绩。